产品规格
| 货号 | 名称 | 规格 | 应用 |
| KC112-1.5 | KEL-DR Transfection Reagent | 1.5ml | 体外转染 DNA 质粒或 RNA |
| KC127-1.5 | KEL-R Transfection Reagent | 1.5ml | 体外转染 RNA 专用 |
产品描述
KEL有两款转染试剂,一款是通用型试剂可以转染DNA质粒和RNA的。另一款是专门转染RNA的。两款试剂都是纳米粒子材料。与其它转染试剂相比,KEL转染试剂具有毒性低、稳定性好、转染简单易行、 重复性好等优点。
应用范围
KEL 转染试剂适应于众多原代培养细胞和转化细胞株的转染,瞬时转染和稳定转染,可用于多种贴 壁细胞以及悬浮细胞系,特别适用于各种常规细胞如 293 ,293T ,COS7 ,A549 ,hela 等细胞,均能得到 较高的转染效率,且重复性好。
KEL-DR Transfection Reagent 是通用型转染试剂,转染 DNA 质粒实验步骤如下:
DNA 转染流程
下列步骤适以 24 孔板为例,所有试剂用量和体积均是按孔计算。
1. 贴壁细胞:转染前一天每孔 0.5-2.0×10 5 个细胞接种于 500µL 完全培养基中,转染时细胞长至 50% 融合最佳。 注:此处务必用带血清的完全培养基,否则细胞容易死。
2. 转染复合物的制备 A 将 KEL-DR Transfection Reagent 转染试剂放置于室温中,使用前轻轻混匀; B 在无菌管中加入 50ul OPTI-MEM 或 基础DMEM ,并添加 2ul 转染试剂,用移液器轻轻混匀,室 温静置 5 min; C 在另一无菌管中加入 50ul OPTI-MEM 或 基础DMEM ,并添加 0.5ug DNA 质粒,用移液器轻轻混 匀,室温静置 5 min; D 将 KEL-DR Transfection Reagent 培养基混合物滴加至 DNA 质粒培养基混合物中,用移液器轻轻 混匀,室温静置 15~20 min 后,立即转染。 注:B和C中稀释用的培养基不能含血清。
3. 在每孔细胞中加入 100µL 转染复合物,轻轻摇匀。
4. 转染 6-8 小时后可更换完全培养基。
5. 37℃培养 48-72 小时可检测mRNA 表达,48-96 小时检测蛋白表达。
KEL-R Transfection Reagent 是 RNA 专用型转染试剂,转染 siRNA 实验步骤如下:
siRNA 转染流程
下列步骤以 24 孔板为例,所有试剂用量和体积均是按每孔计算。
1. 贴壁细胞:转染前一日,每孔 0.5-2.0×10 5 个细胞接种于 500µL 完全培养基 中,转染时细胞长至 70% 融合最佳。 注:此处务必用带血清的完全培养基,否则细胞容易死。
2. 转染复合物的制备 A 将 KEL-R Transfection Reagent 转染试剂放置于室温中,使用前轻轻混匀; B 在无菌管中加入50ul OPTI-MEM 或基础DMEM ,并添加 2ul 转染试剂,用移液器轻轻混匀,室温 静置 5 min; C 在另一无菌管中加入 50ul OPTI-MEM 或基础DMEM,并添加40pmol siRNA ,用移液器轻轻混匀, 室温静置 5 min; D 将 KEL-R Transfection Reagent 培养基混合物滴加至 siRNA 培养基混合物中,用移液器轻轻混匀, 室温静置 15~20 min 后,立即转染。 注:B和C中稀释用的培养基不能含血清。
3. 在每孔细胞中加入 100ul 转染复合物,轻轻摇匀。
4. 转染 6-8 小时后可更换成完全培养基。
5. 37℃培养 48 小时检测 mRNA 表达,48或72 小时检测蛋白表达。
| 培养板 | 培养孔面积 | 接种培养液 | 稀释用 Opti-MEM | siRNA 转染 | DNA 转染 | ||
| siRNA | 转染试剂 | DNA | 转染试剂 | ||||
| 96 孔板 | 0.3cm2 | 100µL | 2×10µL | 20 pmol | 1ul | 0.2ug | 1ul |
| 24 孔板 | 2.0cm2 | 500µL | 2×50µL | 40 pmol | 2ul | 0.5ug | 2ul |
| 12 孔板 | 4.0cm2 | 1mL | 2×100µL | 60 pmol | 3ul | 1ug | 3ul |
| 6 孔板 | 10.0cm2 | 2mL | 2×200µL | 100 pmol | 5ul | 2ug | 5ul |
| 60mm | 20.0cm2 | 5mL | 2×0.5mL | 200 pmol | 12ul | 6ug | 12ul |
| 10cm | 60.0cm2 | 15mL | 2×1mL | 500 pmol | 25ul | 12ug | 25ul |
转染效率低影响因素
| 影响因素 | 解决方法 |
| 质粒 |
1. 质粒的浓度太低—建议使用适宜的质粒浓度 2. 质粒的纯度—建议使用高质量的质粒(OD260/280>1 .8) 3. 应使用不含内毒素的质粒 |
| 细胞生长状态 | 稀释转染试剂和siRNA/DNA的培养基,最好用opti-MEM培养基。其次推荐用普通的高糖 或者低糖DMEM培养基。不要用含有细胞因子一类的培养基稀释。会对细胞产生毒性。 |
| 复合比例 | 优化转染试剂/DNA 的复合比例,在推荐的最佳复合比例附近,实验不同的比例, 本产品在大多数细胞中的最适用量比不超过 5/1 |
| 培养时间 | 如使用敏感的细胞株,建议减少复合物与细胞的作用时间 |
产品储存
KEL 转染试剂可在室温下运输,到货后 4 °C 可保存 2 年,本产品已滤菌,使用前轻轻摇匀。 冬季寒冷,如果出现结冻的现象,要将本产品恢复至室温后使用。
注意本转染试剂不能用于人体实验。
| 规格 | 储存条件 | 有效期 |
| 1.5ml | 2-8℃ | 24个月 |
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