KEL转染试剂操作手册
1. 产品规格
货号 | 名称 | 规格 | 应用 |
KC112-1.5 | KEL-DR Transfection Reagent | 1.5ml | 体外转染DNA质粒或RNA |
KC127-1.5 | KEL-R Transfection Reagent | 1.5ml | 体外转染RNA专用 |
KEL有两款转染试剂，一款是通用型试剂可以转染DNA质粒和RNA的。另一款是专门转染RNA的。两款试剂都是纳米粒子材料。与其它转染试剂相比，KEL转染试剂具有毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。
3. 应用范围
KEL转染试剂适应于众多原代培养细胞和转化细胞株的转染，瞬时转染和稳定转染，可用于多种贴壁细胞以及悬浮细胞系，特别适用于各种常规细胞如293，293T，COS7，A549，hela等细胞，均能得到较高的转染效率，且重复性好。
4. KEL-DR Transfection Reagent是通用型转染试剂，转染DNA质粒实验步骤如下：
DNA转染流程
下列步骤适以24孔板为例，所有试剂用量和体积均是按孔计算。
1. 贴壁细胞：转染前一天每孔0.5-2.0×105个细胞接种于500 µL含抗生素的培养基中，转染时细胞长至50%融合最佳。
2. 转染复合物的制备
A将KEL-DR Transfection Reagent转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀;
B在无菌管中加入50 ul无血清培养基或 OPTI-MEM，并添加2ul转染试剂，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min;
C在另一无菌管中加入50 ul无血清培养基或OPTI-MEM，并添加0.5ug DNA质粒，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min;
D将KEL-DR Transfection Reagent培养基混合物滴加至DNA质粒培养基混合物中，用移液器轻轻混匀，室温静置15~20 min后，立即转染。
3. 在每孔细胞中加入100µL转染复合物，轻轻摇匀。
4. 转染6-8小时后可更换完全培养基。
5. 37℃培养24-72小时可检测mRNA表达，48-96小时检测蛋白表达。
5. KEL-R Transfection Reagent是RNA专用型转染试剂，转染siRNA实验步骤如下：
siRNA转染流程
下列步骤以24孔板为例，所有试剂用量和体积均是按每孔计算。
1.贴壁细胞：转染前一日，每孔0.5-2.0×105个细胞接种于500 µL含抗生素的培养基中，转染时细胞长至60%~80%融合最佳。
2. 转染复合物的制备
A将KEL-R Transfection Reagent转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀;
B在无菌管中加入50 ul无血清培养基或 OPTI-MEM，并添加2ul转染试剂，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min;
C在另一无菌管中加入50 ul无血清培养基或OPTI-MEM，并添加2ul siRNA，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min;
D将KEL-R Transfection Reagent培养基混合物滴加至siRNA培养基混合物中，用移液器轻轻混匀，室温静置15~20 min后，立即转染。
注：siRNA一般推荐20uM浓度保存, 2ul总量是40pmol。
3. 在每孔细胞中加入100ul转染复合物，轻轻摇匀。
4. 转染6-8小时后可更换成完全培养基。
注 ：如果细胞状态没问题 ，也可以不换液。
5. 37℃培养24-72小时检测mRNA表达，48-96小时检测蛋白表达。
培养板 | 培养孔面积 | 接种培养液 | 稀释用Opti-MEM |
| |
15002166056
