简易操作手册
目录号
CL1071-01、CL1071-02
产品组成
组分 | C1071-01 规格（20 次） | C1071-02 规格（ 60 次） |
pBM16A Vector (20ng/μl ) | 20μl | 20μl×3 |
10×Toposmart | 20μl | 20μl×3 |
Control Insert | 5μl | 5μl |
M13F Primer | 0. 1OD | 0. 1OD×3 |
M13R Primer | 0. 1OD | 0. 1OD×3 |
pBM16A Vector (20ng/μl ) | 20μl | 20μl×3 |
*线性化载体 ，可与试剂盒提供的线性化片段重组 ，排除实验其他影响因素； **线性化片段 ，可与试剂盒提供的线性化载体重组 ，排除实验其他影响因素。
保存条件
-20℃保存 12 个月 ，避免反复冻融。
产品简介
pBM16A Toposmart克隆试剂盒利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切 割再连接的特点将片段克隆到载体中。不仅适用于克隆由Pfu 、KOD 、Xerox 、Phusion 和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物，也可克隆由Taq 、Tth和klenTaq等 DNA聚合酶扩增的带A尾的PCR产物。试剂盒中的pBM16A载体为线性化的质粒。可以 用引物对M13F和M13R进行菌落PCR鉴定阳性克隆。
产品特点
⑴连接反应仅需 5 分钟。
⑵适用于平末端PCR产物和带A尾的PCR产物。
⑶载体采用了新的制备工艺，无需蓝白斑筛选
注意事项
⑴片段的选择：各种DNA聚合酶扩增的PCR产物。
⑵引物要求：PCR引物5’端不能进行磷酸修饰，普通商业化引物即可。
操作步骤
1.连接反应
按下表，在一个 0.2ml PCR 管中依次加入
成分 |
|
DNA 片段 | 0.5-8µl |
pBM16A Topo载体 | 1μl |
10×Toposmart | 1μl |
补水至总体积 | 10μl |
2.反应温度及片段要求
室温下（20-30℃) 放置 0-5 分钟，然后将离心管放置在冰上。如当天不进行转化实验。 请将连接产物置于-20℃保存。
注意：DNA 片段的用量见下表
片段大小（bp） | 最佳用量（ng） |
100-1000 | 20-50 |
1000-2000 | 50-100 |
2000-5000 | 100-200 |
室温下（20-30℃) 反应时间 5-30 分钟，如果室温较低，推荐使用PCR 仪器控制温度。 可以设置 25℃反应 5 分钟。如果 PCR 产物电泳检测仅有很锐利明亮的条带，无引物二 聚体和非特异性条带存在，可直接取 0.5-1µl PCR 产物原液进行克隆。
暂无规格/储存条件/有效期！
暂无相关文献！
QQ
微信
小红书
知乎
微博
公众号
15002166056
